生化分析儀的參數(shù)就是儀器工作的指令,操作者通過設(shè)置正確的參數(shù)控制儀器完成一系列復雜而有序的操作程序。指揮儀器工作的參數(shù)很多,有些參數(shù)是在生產(chǎn)制造中設(shè)置好的,如機械操作、計算機軟件等,只需選擇就可進行工作,全自動生化分析儀廠家這里所說的參數(shù)設(shè)置是指設(shè)置某個具體測試項目的指令,主要包括試劑量、樣品量、測定方法、校正方法、反應時間、測定波長和控制因素等。
1.樣品與試劑的比例
樣品和試劑量的設(shè)置原則一般是根據(jù)試劑說明書上的比例,并結(jié)合儀器的特性進行設(shè)置。儀器的特性包括:樣品和試劑的最小加樣量及加量范圍、最小反應液的體積等。在實際工作中為節(jié)約成本可以根據(jù)比例縮小樣品和試劑用量,但同時必須滿足最小反應液總量。但值得注意的是,樣品量不應少于3μL。否則測試結(jié)果的重復性差。
2.測定方法
生化分析儀一般都具備一點終點法、兩點終點法和連續(xù)監(jiān)測法等,可根據(jù)需要進行選擇。
3.校正方法
儀器內(nèi)設(shè)置的校正方法一般包含二點校正、多點校正、線性、非線性(對數(shù)、指數(shù)法、量程法)等。
二點校正是指用一個濃度的標準品和一個試劑空白進行校正的方法,該法要求反應必須符合朗伯-比爾定律,即標準(工作)曲線呈直線。多點校正是多個具有濃度梯度的標準品用非線性法進行校正,適用于標準(工作)曲線呈各種曲線形式的項目,如多數(shù)的免疫度法。非線性校正包括各種對數(shù)和指數(shù)校正及量程法校正,標準曲線呈對數(shù)或指數(shù)曲線特征的項目選擇所對應方法校正,量程法則是根據(jù)標準曲線上每兩點間濃度與吸光度的關(guān)系計算待測物的濃度。
4.反應時間
生化反應的時間是某一項目所特有的,根據(jù)所采用的測定方法不同而異。一點終點法的總蛋白為10min,白蛋白1min。速率法應為兩個時間點,延滯時間和測定時間,如谷丙轉(zhuǎn)氨酶延滯時間1min,測定時問2min。反應時間應根據(jù)試劑說明書或自己試驗觀察,作合理的選擇和設(shè)置。大多數(shù)全自動生化分析儀用測定點來代表反應時間,如總反應時間是10min,分為34個點,根據(jù)每點所相當?shù)臅r間選擇適當?shù)臏y定點。
5.潮定波長
波長的設(shè)定根據(jù)特定反應產(chǎn)物對光吸收的特點選擇測定波長,如NADH和NADPH是340nm,硝基苯類為405nm其他有色溶液則由其對光的特異性吸收波長而定。除了測定波長外,雙波長測定還要選擇有效的副波長。副波長的選擇原則是干擾物在主波長的吸收與副波長有等吸光率或越接近越好,如已糖激酶法測定糖主波長為340nm,副波長可選380nm,因為血紅蛋白在這兩個波長的吸光度相同,對消除溶血和濁度的影響比較有效,還應該注意副波長不能設(shè)在有色物吸收的靈敏區(qū)域內(nèi),否則會降低測定的靈敏度。
6.線性范圈
按試劑的質(zhì)量而設(shè)置,超過范圍應增加樣品量或稀釋后重測。不同試劑公司的試劑質(zhì)量不一樣,不同樣品試劑比的線性范圍也不一樣,應實測試劑盒的線性范圍。終點法可配制系列不同濃度的標準液,按分析項目的波長、樣品量、試劑量、孵育時間,測定備濃度的吸光度,繪制標準曲線,在線性內(nèi)的最高濃度為線性上限。
此外,全自動生化分析儀廠家在此提醒在使用生化分析儀的過程中,還需注意儀器的工作環(huán)境、儀器的安裝操以及維護保養(yǎng)等。
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