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      終點(diǎn)法:又稱定時(shí)法、取樣法或固定時(shí)間法,它是指化學(xué)反應(yīng)達(dá)到平衡以后對(duì)待測(cè)物定量分析的一種方法。對(duì)一般化學(xué)反應(yīng)來(lái)說(shuō),反應(yīng)產(chǎn)物穩(wěn)定時(shí)為反應(yīng)終點(diǎn)。對(duì)抗原、抗體反應(yīng)來(lái)說(shuō),抗原和抗體形成最大且穩(wěn)定的免疫復(fù)合物時(shí)為反應(yīng)終點(diǎn)。在反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線上為與X軸平行線區(qū)段(即一級(jí)反應(yīng)期)為反應(yīng)終點(diǎn)口終點(diǎn)法一般可分為一點(diǎn)法和兩點(diǎn)法兩種。
      1.一點(diǎn)法:以空氣、水或試劑為空白,以反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)的吸光度減去空白吸光度讀數(shù),求得反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)的吸光度。通過(guò)與相同條件下校準(zhǔn)液反應(yīng)形成的曲線進(jìn)行比較,求得測(cè)定結(jié)果。
      2.兩點(diǎn)終點(diǎn)法:以試劑和樣品混合之后的某一時(shí)間點(diǎn)的吸光度讀數(shù)作為始點(diǎn),以反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度與第一點(diǎn)的吸光度之差求得被測(cè)物的含量。兩點(diǎn)終點(diǎn)法常常應(yīng)用于雙試劑測(cè)定,多以加入第2種試劑前某一點(diǎn)或者加入第2種試劑之后的某一點(diǎn)作為測(cè)定起始點(diǎn)。
      連續(xù)監(jiān)測(cè)法:又稱速率法,是目前酶學(xué)診斷的一種主要方法,該法通過(guò)從多個(gè)點(diǎn)連續(xù)測(cè)定酶促反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)物濃度的增加或底物濃度的減少隨時(shí)間變化的數(shù)據(jù),求出酶促反應(yīng)的初速度,間接計(jì)算酶活性濃度。該法與定時(shí)法的主要區(qū)別是勿需停止酶促反應(yīng),也不需添加任何顯色劑就可測(cè)定反應(yīng)物的變化,很容易找到0級(jí)反應(yīng)的直線的區(qū)段。連續(xù)監(jiān)測(cè)法主要有連續(xù)監(jiān)測(cè)法、兩點(diǎn)速率法和速率B三種方法。
      1.連續(xù)監(jiān)測(cè)法亦稱零級(jí)反應(yīng)速率法或斜率法。在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi),每隔一定時(shí)間(常為2—30秒)讀取一次吸光度值,最少不低于4個(gè)讀數(shù),然后通過(guò)計(jì)算機(jī)將得到的多個(gè)△A做最小二乘法處理,求出單位時(shí)間內(nèi)的反應(yīng)速率△A/min。
應(yīng)用連續(xù)監(jiān)測(cè)法,首先應(yīng)了解線性范圍內(nèi)高、中、低不同濃度的樣品的反應(yīng)曲線,然后再設(shè)計(jì)線性監(jiān)測(cè)期。

      2.兩點(diǎn)速率法在反應(yīng)中選取兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)tl、t2,讀取吸光度A1、A2,然后通過(guò)(A2-A1)/(t2-t1)計(jì)算出△t。
      3.速率B法是在一個(gè)通道內(nèi)同時(shí)進(jìn)行兩項(xiàng)反應(yīng)相關(guān)的速率法測(cè)定。既可作為兩項(xiàng)試驗(yàn),也可用于干擾反應(yīng)或作為樣品空白的自動(dòng)補(bǔ)償。干擾反應(yīng)或作為樣品空白的自動(dòng)補(bǔ)償?shù)幕驹硎峭ㄟ^(guò)儀器的微機(jī)自動(dòng)處理系統(tǒng),在第一反應(yīng)(干擾反應(yīng))一直維持線性的前提下,從第二反應(yīng)(主反應(yīng))速率中扣除第一反應(yīng)速率的延續(xù)影響。
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